Vijesti

Javascript je trenutno onemogućen u vašem pretraživaču.Neke funkcije ove web stranice neće raditi ako je JavaScript onemogućen.
Registrirajte se sa svojim specifičnim podacima i određenim lijekom koji vas zanima, a mi ćemo uskladiti informacije koje nam date sa člancima u našoj opsežnoj bazi podataka i odmah vam poslati PDF kopiju.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Zavod za infektivne bolesti, Prva pridružena bolnica Univerziteta Suzhou, grad Suzhou, provincija Jiangsu, 215000 Tel.tumori probavnog sistema sa 5-godišnjim ukupnim preživljavanjem od 14,1%.Mnogim pacijentima sa HCC dijagnosticira se u uznapredovaloj fazi, tako da je rani skrining od suštinskog značaja za smanjenje smrtnosti od HCC.Pored uobičajenih indikatora detekcije kao što su alfa-fetoprotein u serumu (AFP), alfa-fetoprotein koji reaguje na lektin sočiva (AFP-L3) i abnormalni protrombin (protein II izazvan nedostatkom vitamina K, PIVKA-II), tehnike biopsije tečnosti Pokazalo se da ima dijagnostičku vrijednost u otkrivanju HCC-a.U poređenju sa invazivnim procedurama, biopsija tečnosti može otkriti cirkulišuće ​​maligne metabolite.Tehnike tečne biopsije otkrivaju cirkulirajuće tumorske ćelije, cirkulirajuću tumorsku DNK, cirkulirajuću RNK i egzozome i koriste se za rano skrining, dijagnozu i prognostičku procjenu HCC.Ovaj članak daje pregled molekularne biologije i primjene različitih tehnika biopsije tekućine za izolaciju obećavajućih biomarkera koji mogu biti održive opcije za ranu procjenu HCC radi poboljšanja ranog skrininga visokorizičnih grupa HCC.Ključne riječi: tehnika tečne biopsije, hepatocelularni karcinom, grupa visokog rizika.
Hepatocelularni karcinom (HCC) je čest maligni tumor probavnog trakta, koji se nalazi na šestom mjestu među novim slučajevima malignih tumora kod muškaraca i žena.1 Širom svijeta, rak jetre je treći vodeći uzrok smrti od raka nakon raka pluća i kolorektalnog karcinoma, čineći 8,3% smrtnih slučajeva povezanih s rakom od svih malignih neoplazmi.1 Prognoza HCC je usko povezana sa stadijumom dijagnoze.Glavni razlozi lošeg preživljavanja kod HCC su intrahepatične metastaze, trombi tumora portalne vene i udaljene metastaze koje onemogućuju resekciju, a mnoge od ovih karakteristika su već prisutne kod pacijenata u vrijeme postavljanja dijagnoze.
Na osnovu smjernica za dijagnostiku i liječenje, glavni faktori rizika za razvoj HCC su ciroza jetre, infekcija kroničnim virusom hepatitisa B (HBV) ili hepatitis C virusom (HCV), alkoholna masna bolest jetre i nealkoholna masna bolest jetre (NAFLD). ).2 Pored toga, faktori rizika za HCC uključuju unos hrane kontaminiran aflatoksinom, šistosomijazu, druge uzroke ciroze, porodičnu anamnezu raka jetre, dijabetesa, gojaznosti, pušenja i ozljede jetre uzrokovane lijekovima.Visokorizične grupe od 35 i 45 godina trebale bi imati redovne liječničke preglede.Rani skrining je važna strategija ranog liječenja za poboljšanje ukupnog preživljavanja pacijenata sa HCC.
Biomarkeri kao što su AFP, AFP-L3 i PIVKA-II preporučuju se za rani skrining HCC3,4.Tehnike tekuće biopsije pokazale su obećavajuće rezultate u ranoj dijagnozi i evaluaciji liječenja.5,6 Značajan napredak je postignut u tečnoj biopsiji HCC, koja može imati veću osjetljivost i specifičnost od uobičajenih serumskih markera kao što je AFP (Tabela 1).
AFP je biomarker koji se široko koristi u HCC i trenutno je najdetaljniji biomarker koji se široko koristi za rani skrining, dijagnozu i evaluaciju bolesti.Stalno povišen nivo AFP se smatra faktorom rizika za progresiju HCC.7,8 Stopa detekcije malog hepatocelularnog karcinoma (sHCC) raste s razvojem ultrazvuka i kompjuterske tomografije, a pokazalo se da je AFP posebno neosjetljiv na detekciju hHCC u kliničkoj praksi.Prema retrospektivnoj multicentričnoj studiji9, AFP pozitivan je pronađen u 46% (616/1338) slučajeva HCC i 23,4% (150/641) slučajeva sHCC.Pored toga, nivoi AFP su povišeni kod pacijenata sa hroničnim oboljenjem jetre i cirozom.10 Dakle, AFP ima ograničen efekat skrininga za sHCC.11 Prema azijsko-pacifičkim smjernicama kliničke prakse za hepatocelularni karcinom, upotreba AFP-a se ne preporučuje.12 Klinički dokazi sugeriraju da je PIVKA-II superiorniji od AFP-a u liječenju HCC-a i da kombinacija PIVKA-II i AFP-a ima veća dijagnostička vrijednost kod HCC.13 U poređenju sa biopsijom tkiva, tečna biopsija prvenstveno otkriva metabolite povezane sa tumorom u telesnim tečnostima (krv, pljuvačka, pleuralna tečnost, cerebrospinalna tečnost ili urin) i manje je invazivna za tkiva.14 Osim toga, tečne biopsije mogu odražavati maligne karakteristike koje nisu prisutne u primarnom tumorskom tkivu.15 Tekuće biopsije se još ne testiraju u kliničkoj praksi za sve vrste tumora, ali njihov dijagnostički potencijal kod raka privlači pažnju onkologa.16 Fluidna biopsija može otkriti cirkulirajuće tumorske ćelije (CTC), cirkulirajuću tumorsku DNK (cDNA), cirkulirajuću slobodnu RNK (ecRNA) i egzozome.U ovom članku ćemo raspravljati o karakteristikama, ulozi i primjeni različitih tehnika biopsije tekućine u ranom skriningu visokorizičnih HCC grupa.
Ekstracelularnu DNK (cfDNA) u uzorcima krvi zdravih osoba prvi su opisali 1948. Mandel et al.17 cfDNA je fragment DNK bez ćelija dužine približno 160-180 bp, koji potiče prvenstveno iz limfocita i mijeloidnih ćelija.ctDNA je specifični mutantni DNK fragment koji tumorske stanice oslobađaju u perifernu krv, koji predstavlja genomsku informaciju tumorskih stanica nakon određenih patofizioloških procesa, uključujući nekrozu, apoptozu i izlučivanje.Udio ctDNK u ukupnoj cfDNK uvelike varira u zavisnosti od tipa tumora, a navodi se da su cDNK fragmenti tipično duži od 167 bp.18 Underhillova studija je pokazala da su cfDNA fragmenti generalno kraći od normalne cfDNK.19 U poređenju sa zdravim osobama, ukupna dužina fragmenata cfDNA u krvi pacijenata oboljelih od raka je kraća, tako da se cfDNA može koristiti kao indikator ranog skrininga tumora.Obogaćivanje određenih podskupova dužina fragmenata cfDNA može poboljšati detekciju cDNK povezane s nemetastatskim čvrstim tumorima.Studije su pokazale da se ctDNA nalazi u preko 75% uznapredovalog raka gušterače, debelog crijeva, mokraćne bešike, gastrointestinalnog trakta, jetre, jajnika, dojke, melanoma i raka glave i vrata.20,21 Međutim, količina ctDNA u krvi ovisi o lokaciji tumora.22 U studiji koju je sprovela Bettegoud, otkriveno je da pacijenti sa kolorektalnim karcinomom, karcinomom dojke, jetre, pluća i prostate imaju viši nivo cDNK u krvi od drugih karcinoma.Nasuprot tome, kod pacijenata sa oralnim karcinomom, karcinomom gušterače, karcinomom želuca i gliomom, koncentracija cDNK u krvi bila je niža.dvadeset jedan
Budući da ctDNA sadrži iste genetske mutacije kao primarne tumorske ćelije, cDNA se može koristiti za otkrivanje heterogenih tumor-specifičnih mutacija i epigenetskih promjena, uključujući metilaciju, hidroksimetilaciju, varijacije pojedinačnih nukleotida i varijacije broja kopija.dvadeset tri
Metilacija DNK jedna je od najčešćih epigenetskih promjena koje rezultiraju represijom gena.U poređenju sa normalnim ćelijama, postoje razlike u ukupnom nivou metilacije genoma tumorske ćelije, posebno u metilaciji gena tumor supresora, što se može otkriti u ranoj fazi, što sugeriše da promene u metilaciji DNK mogu biti pokazatelj ranog otkrivanje tumorigeneze.Tumorski supresorski geni povezani sa HCC mogu biti inaktivirani metilacijom promotora, čime se stimulira tumorigeneza.24 DNK metilacija je idealan marker za ranu dijagnozu tumora zbog svoje specifičnosti tkiva, mogućnosti detekcije i nezavisnosti od starosti.Osim toga, metilacija DNK je češća u poređenju sa somatskim mutacijama jer postoji više ciljnih regija i nekoliko izmijenjenih CpG mjesta u svakoj regiji ciljnog genoma.25 Pored višestrukih CpG mjesta, veliki broj nezavisnih hipermetiliranih lokusa u ctDNK je identificiran u DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 i RGS10.26 Xu et al.Poređenje uzoraka cfDNA od 1098 pacijenata sa HCC i 835 zdravih kontrola je pokazalo da geni povezani sa HCC snažno koreliraju sa odgovarajućim potpisima metilacije cDNA u plazmi.25 Na osnovu laboratorijske analize razvijen je prediktivni model koji sadrži 10 markera metilacije sa senzitivnošću i specifičnošću od 85,7% i 94,3%, respektivno, a ovi markeri su u velikoj korelaciji sa masom tumora, stadijumom tumora i odgovorom na tretman.Ovi rezultati ukazuju da upotreba markera metilacije cDNA obećava u dijagnozi, praćenju i prognozi HCC.U modelu metilacije koji se sastoji od tri aberantno metilirana gena (APC, COX2, RASSF1A) i jedne miRNA (miR203) koju su predstavili Lu i saradnici27, osjetljivost i specifičnost modela 27 za dijagnosticiranje HBV povezanog HCC-a bile su uporedive.80%.Pored toga, model bi mogao otkriti 75% nedijagnostikovanih pacijenata sa HCC sa nivoom AFP od 20 ng/mL.Gen za protein familije 1A domena povezan sa Ras (RASSF1A) je glavna repetitivna sekvenca DNK u ljudskom genomu.Araujo i dr.zaključili su da hipermetilacija promotora RASSF1A može biti vrijedan biomarker za rani skrining HCC i potencijalna molekularna meta za epigenetsku terapiju.28 U jednoj studiji, hipermetilacija promotora RASSF1A u serumu pronađena je kod 73,3% pacijenata sa HCC.29 Dugo isprepleteni nukleotidni element 1 (LINE-1) je još jedan vrlo aktivan medijator retrotranspozicije.Hipometilacija LINE-1 je pronađena u DNK 66,7% uzoraka seruma HCC i bila je povezana sa ranim recidivom i lošim preživljavanjem nakon radikalne resekcije.29 Hipermetilacija je uobičajen genetski proces koji igra jedinstvenu ulogu u razvoju ciroze jetre i HCC.30 Nasuprot tome, hidroksimetilacija je proces demetilacije koji inducira reaktivaciju i ekspresiju gena, a detekcija proizvoda 5-hidroksimetilcitozina (5-hmC) u ovom procesu može se koristiti za identifikaciju tumora.Metilacija i hidroksimetilacija cDNK su povezane s tumorigenezom i mogu doprinijeti ranom skriningu HCC.U studiji na 2554 ispitanika, 31 genomski 5-hmCs pronađen je u cfDNA uzorcima, a 32 gena su identificirana poređenjem 5-hmC sekvenci kod pacijenata sa HCC i grupa visokog rizika kao što su oni s kroničnim bolestima.Dijagnostički modeli bolesti jetre.i ciroza.Ovaj model je bio superiorniji od AFP-a u razlikovanju HCC od netumorskog tkiva.
Mutacije u kodirajućim regijama mogu dovesti do transkripcijskih abnormalnosti, što može dovesti do promjena u proteinskim sekvencama i konačno do raka.Jednonukleotidne varijante su važni genomski markeri za rani skrining tumora zbog njihove visoke pouzdanosti tkiva i visoke tumorske i tkivne specifičnosti.Brojne studije vezane za HCC koje koriste sekvenciranje sljedeće generacije (NGS) za sekvenciranje egzoma i cijelog genoma raka identificirale su uobičajene mutirane ćelijske gene kao što su TP53 i CTNNB1, kao i nekoliko uključujući ARID1A, MLL, IRF2.Novi geni, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 i JAK1 pokazuju umjerene stope mutacija. Analiza funkcije mutantnih gena sugerira da promjene u remodeliranju kromatina, Wnt/β-kateninu i JAK/STAT signalnoj transdukciji, putu P53-staničnog ciklusa, epigenetskim modifikatorima, putevima oksidativnog stresa, PI3K/AKT/MTOR putu i RAS/RAF/ Put MAPK kinaze igra ključnu ulogu u onkogenezi HCC.32,33 U studiji u kojoj su otkrivene mutacije povezane s tumorom, Huang i suradnici su otkrili da je učestalost mutacija povezanih s tumorom zavisnih od ctDNA bila 19,5%, a specifičnost 90% .34 Pored toga, kod pacijenata koji su doživjeli vaskularnu invaziju je veća vjerovatnoća da će imati mutacije ctDNK (P=0,041) i kraće preživljavanje bez recidiva (P<0,001). Analiza funkcije mutantnih gena sugerira da promjene u remodeliranju kromatina, Wnt/β-kateninu i JAK/STAT signalnoj transdukciji, putu P53-staničnog ciklusa, epigenetskim modifikatorima, putevima oksidativnog stresa, PI3K/AKT/MTOR putu i RAS/RAF/ Put MAPK kinaze igra ključnu ulogu u onkogenezi HCC.32,33 U studiji u kojoj su otkrivene mutacije povezane s tumorom, Huang i suradnici su otkrili da je učestalost mutacija povezanih s tumorom zavisnih od ctDNA bila 19,5%, a specifičnost 90% .34 Pored toga, kod pacijenata koji su doživjeli vaskularnu invaziju je veća vjerovatnoća da će imati mutacije ctDNK (P=0,041) i kraće preživljavanje bez recidiva (P<0,001).Analiza funkcije mutantnih gena sugerira da se promjene u remodeliranju hromatina, Wnt/β-kateninu i JAK/STAT signalizaciji, putu staničnog ciklusa P53, epigenetskim modifikatorima, putevima oksidativnog stresa, PI3K/AKT/MTOR putu i RAS/RAF/MAPK kinaznom putu igraju kritičnu ulogu u tumorigenezi HCC.32,33 U studiji koja je pronašla mutacije povezane s tumorom, Huang i sar.otkrili da je učestalost mutacija povezanih s tumorom zavisnih od ctDNA bila 19,5%, a specifičnost 90%..34 Osim toga, kod pacijenata sa sosudistoj invazijom češće se susreću mutacije cDNK (P=0,041) i više korotka bezrecidivna živost (P<0,001). .34 Pored toga, pacijenti sa vaskularnom invazijom imali su više mutacija cDNK (P=0,041) i kraće preživljavanje bez bolesti (P<0,001).Funkcionalna analiza mutantnih gena otkrila je remodeliranje hromatina, Wnt/β-katenin i JAK/STAT signalizaciju, put ćelijskog ciklusa P53, epigenetičke modifikatore, put oksidativnog stresa, put PI3K/AKT/MTOR i RAS/RAF/MAPK kinazni put igra ključnu ulogu u onkogenezi HCC. 32,33 在 一 项 检测 到 肿瘤 相关 突变 的 研究 中 肿瘤 等 等 人 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 人 发现 肿瘤 为 19,5%, 特异性 为 90% .34 此外, 经历 血管 侵犯 的 患者 更 有 可能 发生 CTDNA突变（P=0,041)和更短的无复发生存期 (P<0,001)。 32.33.短的无复发生存期(P<0,001)。32,33 U studiji koja je pronašla mutacije povezane s tumorom, Huang et al.otkrili su da su mutacije povezane s tumorom 19,5% zavisne od cDNK sa specifičnošću od 90% 34. Osim toga, pacijenti koji su bili podvrgnuti vaskularnoj invaziji imali su veću vjerovatnoću da razviju cDNK.mutaciâ (P = 0,041) i više korotkaâ bezrecidivna vyživaemostʹ (P <0,001). mutacija (P=0,041) i kraće preživljavanje bez bolesti (P<0,001).Još jedan uobičajeni gen pokretača HCC-a je TP53, koji ima stopu mutacije od preko 30%.Istraživanja su pokazala da se učestalost mutacija TP53 u ctDNK u krvi i urinu kreće od 5% do 60%.35 Johanova studija je pokazala da spektar mutacija ctDNA u kasnoj HCC ima sličnu stopu mutacije kao i ranoj HCC, uključujući TERT promotor (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), mutacije u AXIN1 ., ARID2, KMT2D i TSC2 (po 6%).36 Onkogen β-katenina (CTNNB1) igra važnu ulogu u Wnt signalnom putu.Koaktivator transkripcije CTNNB1 može promovirati ekspresiju gena, što može dovesti do proliferacije stanica, inhibicije apoptoze i angiogeneze.CTNNB1 također može stupiti u interakciju s TERT-om da izazove transformaciju hepatocita.33 TERT promotor je često mutiran u nekim solidnim tumorima.Promjene u TERT, jednoj od najranijih genetskih promjena u malignoj transformaciji HCC, mogu dovesti do reaktivacije telomeraze u cirotskim hepatocitima i mogu promovirati proliferaciju i spriječiti starenje.Prijavljeno je da se mutacije u promotoru 33-37 TERT javljaju kod 59-90% pacijenata sa proliferativnim čvorovima jetre i ranim HCC-om i povezane su sa preživljavanjem.38
Promjene broja kopija (CNA) su važan podtip somatskih mutacija.Istraživanja su pokazala da je široko rasprostranjeno i žarište CNA genomski potpis sposoban predvidjeti tumorsku imunološku infiltraciju i isključenje kod nekih vrsta raka.39 Aktivna signalizacija infiltracije, visoka citolitička aktivnost, teška upala i genetski markeri povezani sa prezentacijom antigena u HCC.Analiza niza podataka o polimorfizmu pojedinačnih nukleotida kod 477 ispitanika pokazala je nisko opterećenje CNS-a.Nasuprot tome, hromozomski nestabilni tumori sa visokim ekstenzivnim opterećenjem CNA pokazali su znakove imunološkog odbacivanja i bili su povezani sa proliferacijom, popravkom DNK i disfunkcijom TP53.Xu et al.pokazali su da je grupa HCC imala više CNA rezultate od grupe s hroničnim oboljenjem jetre.40 Koristeći sekvenciranje cijelog genoma jedne ćelije, otkriveno je da se CNA pojavljuju rano u hepatokarcinogenezi i ostaju relativno stabilne tokom progresije tumora.41 Chung et al.otkrili su da su nivoi cfDNK značajno povišeni kod pacijenata sa HCC i da su CNA u cfDNK u čitavom genomu važan nezavisni prognostički marker kod pacijenata sa HCC liječenim sorafenibom.42 Pacijenti sa većim CNA opterećenjem imali su veću vjerovatnoću da će imati progresiju bolesti i smrt od onih sa manjim CNA opterećenjem.Ollerich et al.otkrili da se indeks nestabilnosti broja kopija (CNI) može koristiti za procjenu CNA u cfDNK pacijenata oboljelih od raka.Oni su primijetili da su pacijenti sa uznapredovalim karcinomom imali značajno više CNI rezultate od kontrolne grupe, koja procjenjuje odgovor pacijenata na sistemsku kemoterapiju i imunoterapiju.43 Ovi rezultati sugeriraju da CNA pronađeni u uzorcima tečne biopsije mogu poslužiti kao prognostički indikatori kod pacijenata sa uznapredovalim rakom.HCC na pozadini sistemske terapije.
Trenutno se metode koje se koriste za otkrivanje ctDNK mogu podijeliti na ciljane i neciljane metode.Ukratko, ciljane metode kao što su digitalna polimerazna lančana reakcija (dPCR), BEAMing digitalni PCR, Amplification Refractory Mutation System-PCR, Capp-Seq i Tam-Seq su visoko osjetljive na unaprijed definirane gene.Metode izvan cilja, kao što su sekvenciranje cijelog genoma i NGS, pružaju sveobuhvatan pogled na cijeli genomski pejzaž.44 U poređenju sa ciljnim panelima, sekvenciranje celog genoma može otkriti ne samo tačkaste mutacije i umetanja, već i preuređenje i varijacije broja kopija.prognoza, a CTC i cfDNA su dobri indikatori koji se mogu koristiti za dinamičko praćenje HCC.45 Pored toga, cfDNK analiza može biti korisnija u otkrivanju HCC.Yan et al.pokazalo je da je cfDNA u plazmi pacijenata sa HCC značajno viša nego kod pacijenata sa fibrozom jetre i zdravih kontrola.U poređenju sa AFP-om, očekuje se da će ctDNA biti bolji skrining marker za rani HCC.46 U prospektivnoj studiji od 47 tečnih biopsija koje su testirale cfDNK i proteine ​​u populacijskoj populaciji, pokazalo se da su efikasne u razlikovanju pacijenata sa HCC od pacijenata bez HCC.U praćenju 331 ultrazvučnog normalnog i AFP-negativnog pacijenta, osjetljivost i specifičnost cfDNA za dijagnosticiranje HCC-a bile su 100% i 94%, respektivno, tako da je cDNK mogla otkriti HCC kod asimptomatskih HBsAg seropozitivnih osoba.U Yeo48 studiji, visoka učestalost (92,5%) hipermetilacije promotora RASSF1A pronađena je kod pacijenata sa HCC.Osim toga, Xu et al.kreirao dijagnostički model za predviđanje HCC koristeći panel specifičnih markera metilacije sa specifičnošću i osjetljivošću od 90,5% i 83,3%, respektivno.Panel omogućava da se pacijenti sa HCC razlikuju od pacijenata sa drugim oboljenjima jetre, što je bolje od AFP-a.Također su otkrili da normalne kontrole koje su bile pozitivne mogu imati faktore rizika za HCC, kao što su HBV infekcija ili anamneza upotrebe alkohola.25 Pretpostavljamo da faktori visokog rizika za HCC mogu potaknuti hipermetilaciju cfDNA, koja potom doprinosi progresiji HCC, te stoga cfDNA može igrati ključnu ulogu u skriningu za grupe visokog rizika.Cai et al.sažimaju čitav niz ctDNA mutacija i nude robusnu strategiju za procjenu tumorskog opterećenja kod pacijenata.49 Ova strategija može identificirati tumorigenezu u medijanu od 4,6 mjeseci prije promjene slike i pokazala je superiorne dijagnostičke performanse u poređenju sa serumskim biomarkerima AFP, AFP-L3 i PIVKA-II.Dijagnostička vrijednost cDNK testiranja je dokazana kada procjena slike nije dostupna, tako da je cDNK testiranje od vrijednosti u dijagnozi ranog HCC-a u grupama visokog rizika.Nedavno su naučnici koristili NGS tehnologiju za analizu indikatora multivarijantne genetske varijacije (uključujući 5-hidroksimetilcitozin, 5′-motiv, fragmentaciju, tragove nukleozoma, HIFI) u 3204 klinička uzorka i cfDNK.50 ponovo validiranih HIFI modela sa tri nezavisna skupa za obuku, testiranje i testove pokazalo je stabilnu i pouzdanu diskriminaciju između HCC i ne-HCC populacije sa 95,79% i 95,42% osjetljivosti u HCC-specifičnim testnim i test setovima, respektivno.Polovi su iznosili 95,00%, odnosno 97,83%.Dijagnostička vrijednost HIFI metode veća je od one AFP u razlikovanju HCC od ciroze.Osim toga, ctDNA se također koristi u kirurškom liječenju.Atsushi et al.određivali su preoperativne serumske nivoe ctDNA kod pacijenata sa HCC i otkrili da su stopa recidiva i stopa ekstrahepatičnih metastaza u cDNK pozitivnoj grupi bile značajno veće nego u cDNA negativnoj grupi, a nivoi cDNK su bili značajno povezani.sa progresijom tumora.51 Budući da je visoko osjetljiv biomarker, ctDNK može predvidjeti sposobnost HCC-a da napadne krvne sudove.Wang et al.Urađeno je sekvenciranje cijelog genoma 46 pacijenata sa HCC, a multivarijantna analiza je pokazala da je granična vrijednost frekvencije alela varijante cDNK za invaziju u mikrožile 0,83%, osjetljivost 89,7% i specifičnost 80,0%.nezavisni faktor rizika za mikrovaskularnu invaziju kod resektabilnog HCC-a, što sugerira da cDNA može pomoći u vođenju optimalnog liječenja.Zaključno, ctDNK je u potpunosti uključen u pojavu i razvoj HCC i može se koristiti za rani skrining, hiruršku evaluaciju i praćenje bolesti.
CTC su maligne ćelije koje potiču od primarnih tumora ili metastaza koje metastaziraju u krvotok.Tumorske stanice luče matriks metaloproteinaze (MMP), koje razgrađuju bazalnu membranu, omogućavajući tumorskim stanicama da direktno uđu u krvne i limfne žile.Međutim, većina CTC se brzo eliminira anoikijem, imunološkim napadom ili stresom na smicanje.53 Epitelno-mezenhimalna tranzicija (EMT) omogućava da se CTC lako izoluju iz primarnog tumorskog tkiva, napadaju kapilare i steknu značajno poboljšano preživljavanje, metastaziranje, invazivnost i otpornost na lijekove.Studije su pokazale da postoji duboka heterogenost između različitih tumorskih ćelija u primarnim metastatskim tumorima.Dakle, CTC analiza može dovesti do sveobuhvatnog razumijevanja heterogenosti tumorskih ćelija.54
Specifični markeri za CTC-ove povezane s HCC uključuju glipikan-3 (GPC3), asialoglikoproteinski receptor (ASGPR), molekul adhezije epitelnih ćelija (EpCAM) i markere povezane sa matičnim ćelijama kao što su CD44, CD90, 55 i međućelijski adhezioni molekul (molekula intercelularne adhezije ICAM11).) .56 GPC3 marker je protein usidren na ćelijskoj membrani koji se klinički koristi za patološku analizu i karakterizaciju HCC.57 Ekspresija GPC3 je češća u tumorskim ćelijama HCC sa srednjom i niskom diferencijacijom i promoviše ekstrahepatičnu migraciju;pored toga, prisustvo GPC3+ CTC-a ukazuje na metastatski HCC.58 ASGPR je transmembranski protein eksprimiran samo na površini hepatocita i visoko je eksprimiran u dobro diferenciranim HCC.EpCAM je jedan od najčešće korištenih proteina povezanih s membranom za hvatanje CTC.EpCAM je identifikovan kao površinski marker ćelija HCC sa karakteristikama matičnih ćelija,59 što je u korelaciji sa različitim kliničko-patološkim karakteristikama HCC, kao što su vaskularna invazija, procenjeni nivoi AFP-a i uznapredovali stadijum raka jetre u bolnici u Barseloni (BCLC).Fenotip 60 CTC EMT je visoko metastatski.54 EMT procesi u CTC promovišu metastaze HCC.Ekspresija EMT markera kao što su vimentin, twist, E-box cink finger binding (ZEB) 1, ZEB2, puž, puž i E-kadherin proučavana je kod CTC-ova izvedenih iz jetre pacijenata sa HCC.58 CanPatrol™ sistem koji je razvio Cheng [61] klasifikovao je CTC u tri fenotipske podgrupe na osnovu pretežno izraženih markera: epitelni fenotip (EpCAM, CK8/18/19), mezenhimski fenotip (vimentin, umotani) i mešoviti fenotipovi.Kod 176 pacijenata, ukupni CTC je bio bolji od AFP u razlikovanju HCC od benigne bolesti jetre.Vrijednosti AUC za ukupni CTC, AFP i kombinovani ukupni CTC i AFP bile su 0,774 (95% CI, 0,704–0,834), 0,669 (95% CI, 0,587–0,750) i 0,821 (95% CI, 0,856–0,856– ).), respektivno.CTC klasifikacija zasnovana na EMT-u može predvidjeti dijagnozu HCC-a, rani recidiv, metastaze i kraće ukupno vrijeme.
Trenutno metode za otkrivanje CSC uključuju fizičke metode i biološke metode.Fizičke metode, koje se često nazivaju obogaćivanje na osnovu biofizičkih svojstava, uglavnom zavise od fizičkih svojstava CSC-a, kao što su veličina, gustina, naboj, mobilnost i deformabilnost.U zavisnosti od fizičkih svojstava, postoje različite metode kao što su sistemi zasnovani na filtraciji, dielektroforeza, itd. Potonje, takođe poznato kao obogaćivanje zasnovano na imunoafinitetu, uglavnom se zasniva na vezivanju antigen-antitelo jer metoda koristi antitela protiv tumor-specifičnih biomarkera kao što su EpCAM, ASGPR, receptor humanog epidermalnog faktora rasta 2 (HER2), prostata specifični antigen (PSA), humani pancitokeratin (P-CK) i karbamoil fosfat sintaza 1 (CPS1).62 Druga vrsta, nazvana metoda bez obogaćivanja, koristi protočnu citometriju da razlikuje CTC od leukocita na osnovu većeg omjera i veličine nuklearne i citoplazmatske.Trenutno, jedini test za detekciju CTC-a koji je odobrila FDA je Cell-Search™ sistem, koji koristi EpCAM površinski marker ćelije. Međutim, kombinovana detekcija CTC zasnovana na markerima mogla bi povećati stopu pozitivnosti.54 Mješavina antitela protiv ASGPR i CPS1 postigla je stopu otkrivanja CTC od 91% kod pacijenata sa HCC.63 Zhang i saradnici su koristili CTC-čip sa antitelima protiv ASGPR, P -CK i CPS1, i diferencirali pacijente s HCC od onih sa benignom bolešću jetre ili ne-HCC karcinomom u stopi od 100%.64 Wangova studija je otkrila EpCAM+ CTCs kod 60% od 42 pacijenata s HCC i otkrila značajne korelacije između oba pozitivnosti. stopu i broj CTC-a sa TNM stadijumom.65 Guo i saradnici su otkrili da je PCR rezultat dobijen iz CTC-a bio povišen kod 125/171 (73%) pacijenata čiji je nivo AFP bio <20 ng/mL sa osetljivošću od 72,5% i specifičnost od 95,0%, u poređenju sa 57,0% i 90,0% za AFP na graničnoj vrijednosti od 20 ng/mL.66 Kombinacija AFP i CTC može poboljšati detekciju HCC.45 Vjeruje se da CTC imaju prednost u odnosu na AFP u ranom skriningu grupa. pod visokim rizikom za HCC. Međutim, kombinovana detekcija CTC zasnovana na markerima mogla bi povećati stopu pozitivnosti.54 Mješavina antitela protiv ASGPR i CPS1 postigla je stopu otkrivanja CTC od 91% kod pacijenata sa HCC.63 Zhang i saradnici su koristili CTC-čip sa antitelima protiv ASGPR, P -CK i CPS1, i diferencirali pacijente s HCC od onih sa benignom bolešću jetre ili ne-HCC karcinomom u stopi od 100%.64 Wangova studija je otkrila EpCAM+ CTCs kod 60% od 42 pacijenata s HCC i otkrila značajne korelacije između oba pozitivnosti. stopu i broj CTC-a sa TNM stadijumom.65 Guo i saradnici su otkrili da je PCR rezultat dobijen iz CTC-a bio povišen kod 125/171 (73%) pacijenata čiji je nivo AFP bio <20 ng/mL sa osetljivošću od 72,5% i specifičnost od 95,0%, u poređenju sa 57,0% i 90,0% za AFP na graničnoj vrijednosti od 20 ng/mL.66 Kombinacija AFP i CTC može poboljšati detekciju HCC.45 Vjeruje se da CTC imaju prednost u odnosu na AFP u ranom skriningu grupa. pod visokim rizikom za HCC.Međutim, kombinovana detekcija CTC zasnovana na markerima može povećati procenat pozitivnih rezultata.54 Mešavina anti-ASGPR i CPS1 antitela je postigla stopu detekcije CTC od 91% kod pacijenata sa HCC.63 Zhang et al.koristio CTC-čip sa antitelima protiv ASGPR, P-CK i CPS1, a takođe je razlikovao pacijente sa HCC od onih sa benignim oboljenjem jetre ili ne-HCC u stopi od 100%.častota i broj COK sa stadijem TNM.65 Guo i suautori su otkrili da je pokazivač PCR, dobijen iz COK, povećan za 125/171 (73%) pacijenata, u kojem je nivo AFP bio <20 ng/ml s osjetljivošću 72,5% i specifičnost 95,0% u odnosu na 57,0% i 90,0% za AFP pri porogovom urovnu 20 ng/ml.66 Kombinacija AFP i COK može otkriti GCK.45 Sčitava se da COK ima prednost pred AFP pri ranom skriningu grupp. učestalost i broj CTC sa TNM stadijumom.65 Guo i saradnici su otkrili da je PCR izveden iz CTC bio povišen kod 125/171 (73%) pacijenata koji su imali nivoe AFP <20 ng/mL sa osetljivošću od 72,5% i specifičnošću 95,0% u poređenju sa 57,0% i 90,0% za AFP na graničnom nivou od 20 ng/mL.66 Kombinacija AFP i CTC može poboljšati otkrivanje HCC.45 Smatra se da CTC imaju prednost u odnosu na AFP u ranom skriningu grupe.sa visokim rizikom od HCC.Međutim, kombinovana detekcija CTC-a zasnovana na markerima može povećati procenat pozitivnih rezultata.54 Mješavina anti-ASGPR i CPS1 antitela postigla je stopu detekcije CTC od 91% kod pacijenata sa HCC.63 Zhang et al.koristili CTC čipove sa antitelima protiv ASGPR, P-CK i CPS1 i izdvojili pacijente sa HCC od benigne bolesti jetre i ne-HCC sa 100%.64 Wangova studija je identifikovala 60% EpCAM+ CTC-a kod 42 pacijenta sa HCC i pronašla značajnu korelaciju između incidencije i broja CTC-a u TNM fazi. 65 GUO 等 人 发现, 在 AFP 水平 <20 ng / ml 的 125/171 (73%) 名 患者 中, CTC 衍生 的 PCR 评分 升高, 敏感性 为 72,5%, 特异性 为 95,0%, 而 AFP 在 截止值为20 ng/mL 时的特异性为57,0% 和90,0%. 65 GUO 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 g / ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ,, CTC 衍生 PCR 评分, 敏感性 为 为 72,5%, 为 95,0%, AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 为 截止 截止 截止 截止 截止值 为 截止 截止 截止 截止 截止值 的 特异性 为 57,0% 和 90,0%.65 Guo et al.otkriveno je da je kod 125/171 (73%) pacijenata sa urovnom AFP <20 ng/ml pokazatelji PCR, dobijeni uz pomoć COK-a, povećani osjetljivost 72,5% i specifičnost 95,0%, u to vrijeme kao AFP na urovnu otsečki Specifičnost sastavljala 20 ng/ml. otkrili su da su kod 125/171 (73%) pacijenata sa nivoom AFP <20 ng/mL, vrijednosti PCR-a dobivene iz CTC-a bile povišene sa osjetljivošću od 72,5% i specifičnošću od 95,0%, dok je AFP bio na graničnoj specifičnosti bio 20 ng/mL.ml iznosio je 57,0% i 90,0%.66 Kombinacija ORP i CTC poboljšava otkrivanje HCC.45 Smatra se da su CTC superiorni u odnosu na AFP u ranom skriningu visokorizičnih populacija HCC.Stoga, za CTC-pozitivne i visokorizične HCC grupe, CTC testiranje treba rutinski kombinovati sa ultrazvukom i detekcijom AFP.Međutim, CTC se smatraju važnim prediktorima tumorskih metastaza i recidiva, a otkrivanje CTC se ne preporučuje kao dijagnostički alat.62 Stoga, CTC može poslužiti kao bolji prediktivni biomarker od drugih trenutno korištenih markera. Zhou i saradnici su otkrili da pacijenti sa povećanim brojem EpCAM+ CTC i regulatornih T ćelija pokazuju veći rizik od razvoja recidiva HCC, nego oni sa malim brojem CTC, sa omjerom recidiva od 66,7% naspram 10,3% (P < 0,001).67 Sličnu studiju objavili su Zhong i saradnici.68 Osim toga, Qi je otkrio da je 101 od 112 pacijenata (90,81%) sa HCC, uključujući i one sa ranom stadijumom bolesti, bili pozitivni na CTC i da su vrlo mali čvorovi HCC otkriveni nakon 3 do 5 mjeseci praćenja. Zhou i saradnici su otkrili da pacijenti sa povećanim brojem EpCAM+ CTC i regulatornih T ćelija pokazuju veći rizik od razvoja recidiva HCC od onih sa malim brojem CTC, sa omjerom recidiva od 66,7% naspram 10,3% (P < 0,001).67 A Sličnu studiju su objavili Zhong i saradnici.68 Pored toga, Qi je otkrio da je 101 od 112 pacijenata (90,81%) sa HCC, uključujući i one sa ranom stadijumom bolesti, bili pozitivni na CTC i da su vrlo mali čvorovi HCC otkriveni nakon 3 do 5 mjeseci praćenja. Čžou i dr.otkriveno je da je kod pacijenata sa povećanim brojem COK EpCAM+ i regulacionim T-kletokom rizik od nastanka GCK bio veći, nego kod pacijenata sa niskim brojem COK, sa koeficijentom ponavljanja od 66,7% naspram 10,3% (P <0,001)67. Zhou i saradnici su otkrili da pacijenti sa povišenim EpCAM+ CTC i regulatornim T ćelijama imaju veći rizik od recidiva HCC od onih sa niskim CTC, sa stopom recidiva od 66,7% naspram 10,3% (P<0,001)67.Sličnu studiju su sproveli Zhong et al.68. Pored toga, Qi je otkrio da je 101 od 112 pacijenata (90,81%) sa HCC, uključujući i one sa ranom bolešću, imalo CTC i da su vrlo mali čvorovi HCC otkriveni nakon 3 do 5 mjeseci praćenja. Zhou 等 人 发现, 与 CTC 数量 较 少 的 患者 相比, epcam + ctc 和 调节性 t 细胞 数量 升高 的 患者 发生 hcc 复发 的 风险 更 高, 复发率 分别 为 66,7% 和 10,3% (p <0,001). Zhou 等 人 发现 与 与 患者 相比, epcam + ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 更, 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10,3% ( p <0,001) . . . . . . . . . . . Čžou i dr.otkriveno je da pacijenti sa povećanim brojem COK EpCAM+ i regulacionim T-kletokom imaju veći rizik od GCK u odnosu na pacijente sa manjim brojem COK-a, sa frekvencijom od 66,7% i 10,3% prema tome (P <0,001). Zhou et al.otkrili su da pacijenti sa povišenim EpCAM+ CTC i regulatornim T ćelijama imaju veći rizik od recidiva HCC u poređenju sa pacijentima sa manje CTC, sa stopama recidiva od 66,7% i 10,3%, respektivno (P < 0,001).Sličnu studiju izvijestili su Zhong et al.68 Pored toga, Qi je otkrio da je 101 od 112 pacijenata sa HCC (90,81%), uključujući pacijente sa ranom bolešću, imalo pozitivne rezultate CTC i otkrilo vrlo male čvorove HCC nakon 3 posjete.Posmatranje do 5 mjeseci.Takođe su pronašli CTC kod 12 pacijenata sa hroničnom HBV infekcijom i pronašli male tumore HCC u roku od 5 meseci kod 2 CTC pozitivna pacijenta.69 Dakle, CTC se mogu koristiti za predviđanje HCC, 70 ali se mogu rutinski koristiti kao prediktivni biomarkeri.
Kao i cfDNK, cfRNA se oslobađa u krvotok kroz različite sisteme.Ovi molekuli u perifernoj krvi predstavljaju kancerogeno tkivo porijekla.U poređenju sa markerima otkrivenim neinvazivnim metodama, cfRNA su više dinamički regulisane, tkivno-specifične i zastupljene u ekstracelularnom okruženju.Značaj i dijagnostička vrijednost 71 miRNA (miRNA) u HCC je zabilježena u mnogim studijama.miRNA su endogene nekodirajuće RNK (ncRNA) koje regulišu različite molekularne biološke aktivnosti inhibirajući translaciju ciljnih glasničkih RNK ​​(mRNA).miRNA se nalaze u apoptotičkim tijelima inkapsuliranim u egzozome, ali se također mogu stabilno vezati za serumske proteine ​​i lipide u perifernoj krvi i mogu se koristiti za procjenu HCC.mikroRNA su uključene u regeneraciju jetre, metabolizam lipida, apoptozu, upalu i razvoj HCC-a.72 Onkogene miRNA kao što su miR-21, miR-155 i miR-221 su dobro poznate u HCC.Konkretno, miR-21 igra ključnu ulogu u sintezi kolagena u ekstracelularnom matriksu i fibrozi i promovira hepatokarcinogenezu aktiviranjem hematopoetskih matičnih stanica.72,73 MiRNA supresora tumora u HCC uključuju miRNA-122, miRNA-29, porodicu Let-7 i porodicu miRNA-15.Porodica Let-7 sastoji se od mnogih tumor supresorskih miRNA koje ciljaju na porodicu RAS.Porodica miR-15 uključuje miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 i miR-497, koji imaju komplementarne sekvence za određene mRNA.Osim toga, duge nekodirajuće RNK (lncRNA) i kružne RNK (cirRNA) su također važne za rano skrining HCC.lncRNA predstavljaju najširu klasu ncRNA, uključujući ncRNA slične mRNA, i uključene su u patogenezu mnogih ljudskih bolesti.LncRNA imaju regulatornu ulogu u mikrookruženju jetre i kroničnoj bolesti jetre.74 CircRNA su također klasa ncRNA sa višestrukim funkcijama u regulaciji ekspresije gena.Nedavno su circRNA smatrane dijagnostičkim alatima za HCC.
Cirkulirajuća slobodna RNK ima izuzetnu stabilnost, uključujući otpornost na temperaturu, pH i RNKazu, što čini izolaciju fnRNA iz periferne krvi manje zamornom upotrebom standardnih metoda pročišćavanja RNK.Najčešće korištene metode uključuju NGS, mikroniz i RT-qPCR.NGS omogućava mjerenje mikroRNA u cijelom genomu.Međutim, ova metoda je skupa i analiza nije standardizirana.Nasuprot tome, RT-qPCR je jeftin, brzo umnožava nukleinske kiseline i nudi mnoge prednosti kao što su veća osjetljivost, veća preciznost, širi dinamički raspon i zahtijeva manje uzoraka.Mikronizovi su još jedna metoda koja se koristi za detekciju miRNA zasnovana na osjetljivoj i specifičnoj hibridizaciji ciljnih miRNA sa komplementarnim DNK sondama, 75 ali analiza podataka mikromreža oduzima mnogo vremena.
Izvještava se da su cirkulirajući miR-122 i Let-7 potencijalno korisni u dijagnosticiranju ranog stadijuma HCC u grupama visokog rizika, markera kod pacijenata sa premalignim čvorovima povezanim s HBV i ranom stadijumu HCC.76 Cai et al.otkrili da su članovi porodice Let-7 (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 i miR-199a/b) izloženi riziku od hronične HCC kod pacijenata sa hepatitisom.Porodica Let-7 može poslužiti kao efikasan surogat biomarker za predviđanje razvoja HCC-a u grupama visokog rizika povezanih sa hroničnim hepatitisom C. 77 miR-122 ima visoku dijagnostičku tačnost u otkrivanju ranog HCC-a kod pacijenata sa cirozom jetre.78 Serum koji cirkuliše MiR-107 je takođe procenjen u ranim fazama HCC, 79 i pokazao je dobar potencijal u populacijama visokog rizika.Zhou i ostali su izvijestili da panel miRNA (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a i miR-801) može razlikovati HCC od kroničnog hepatitisa B (CHB) i ciroze osjetljivost je bila 79,1% i 75%, a specifičnost 76,4% i 91,1%.80 U HBV povezanom HCC, otkrili smo da su nivoi miR150 značajno smanjeni u poređenju sa onima kod hroničnih HBV pacijenata bez HCC (osjetljivost 79,1%, specifičnost 76,5%).-224 je bilo povišeno u HCC u poređenju sa zdravim kontrolama, a analize podgrupa su pokazale više nivoe kod pacijenata sa HCC povezanim sa HBV.pacijenti s cirozom povezane s hepatitisom B i HCC su identificirali siRNA klasifikator koji sadrži sedam različito eksprimiranih siRNA koje mogu otkriti HCC u različitim kontrolama;Raspon AUC na ranom skriningu je bolji od AFP dobrovoljaca.Otkrili su da četiri miRNA (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p i miR-365a-3p) mogu razlikovati pacijente sa HCC od pacijenata bez HCC.Pet prekomjerno izraženih miRNA (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p i miR-148a-3p) se smatraju potencijalnim HBV infekcijama kod HCC, ciroze i CHB biomarkera, posebno miR-34a-5p može biti biomarkeri za cirozu jetre,85 i mogu biti potencijalni biomarkeri za rani skrining HCC u visokorizičnim populacijama.Najviše proučavana lncRNA u HCC je visoko aktivirana kod raka jetre (HULC).Druge studije su pokazale da se HULC koji cirkuliše kod pacijenata sa HCC može koristiti kao dijagnostički marker jer je ova lncRNA visoko regulisana kod pacijenata sa HCC u poređenju sa zdravim osobama.71,86 Među ostalim lnRNA, LINC00152 se smatra najboljom dijagnostičkom lncRNA zbog svoje visoke AUC, osjetljivosti i specifičnosti.86 U jednoj studiji, ekspresija LINC00152 u perifernoj krvi postepeno se povećavala od normalne zdrave kontrole do pacijenata sa CHB i cirozom, i konačno je bila najveća kod HCC.Studije ekspresije circSMARCA5 u plazmi pacijenata sa HCC su pokazale progresivni pad ekspresije HCC-a u rasponu od hepatitisa do ciroze i prekanceroznih lezija.87 Analiza ROC krivulja potvrdila je potencijal ovih circRNA u razlikovanju pacijenata sa hepatitisom ili cirozom jetre od onih sa HCC, posebno onih sa nivoima AFP ispod 200 ng/mL.Osim toga, Zhu je analizirao 13.617 cikličkih RNK ​​u uzorcima plazme pacijenata sa HBV-om povezanim s HCC i potvrdio da je 6 cikličkih RNK ​​različito eksprimirano kod HCC-a i ciroze povezane s HBV-om, sugerirajući da cRNA mogu biti korisne.markeri za rani skrining visokorizičnih grupa kao što su oni povezani sa oboljenjem jetre, pacijenti sa sklerozom.88
Egzozomi su membranske vezikule prečnika 40–160 nm;višestruki intracelularni vezikuli se spajaju sa ćelijskom membranom i oslobađaju se u ekstracelularni matriks.Sadrže mnoge aktivne komponente, uključujući lipide, proteine, RNK i DNK, i igraju ključnu ulogu u komunikaciji između stanica, kako HCC tako i ne-HCC stanica.89,90 Egzozomi regulišu napredovanje HCC aktiviranjem hepatocitnih fibroblasta i zvezdastih ćelija, imunih ćelija, normalnih hepatocita i HCC ćelija.91 U tumorskom mikrookruženju, tumorske ćelije proizvode veliki broj egzosoma koji se prenose iz ćelija raka u nezrele ćelije, koje su zauzvrat uključene u onkogenezu, degradaciju i ćelijsku signalizaciju.92 Istraživanja su pokazala da egzosomi mogu prenositi onkogene u normalne ćelije tokom patoloških procesa, što može biti jedan od mehanizama tumorske invazije i metastaza.93 Uloga egzosoma u progresiji raka može biti dinamična i specifična za tip raka, 89 Egzozomi se mogu internalizirati od susjednih ili udaljenih stanica kako bi regulisali višestruke ciljne gene u stanicama primaocima koji mogu biti uključeni u međućelijsku komunikaciju iona i interakcije stanične mikrookruženja, oni mogu posreduju u ćelijskoj signalizaciji i metabolizmu.94 Karakteristike i dinamičke promjene kargo molekula egzosoma direktno odražavaju karakteristike i dinamičke promjene roditeljskih tumorskih ćelija,95 što je i osnova za upotrebu egzosoma u dijagnozi i prognozi raka, kao i za predviđanje individualnog odgovora na terapiju protiv raka. ..96
Tradicionalne laboratorijske metode za izolaciju i analizu egzosoma su složene, višestepene i dugotrajne, uključujući ultracentrifugiranje, filtraciju, hromatografiju isključivanja veličine, pročišćavanje imunoafiniteta, Western blotting, enzimski imunosorbentni test (ELISA), PCR i analizu protoka.minijaturni sistemi i platforme lab-on-a-chip koje koriste mikro/nanotehnologiju se široko razvijaju za brzu, pogodnu in situ izolaciju egzosoma.Analiza praćenja nanočestica (NTA) je široko korištena metoda za karakterizaciju veličine i koncentracije egzosoma, uključujući metode kao što su magnetne nanočestice i polihidroksialkanoati.Mikrofluidne i elektrohemijske metode takođe mogu brzo detektovati egzozome sa visokim prinosima.
Egzozomalni proteini su važni markeri za dijagnozu HCC.U Arbelaiz studiji, nivo 98 RasGAP SH3 vezujućeg proteina (G3BP) i polimernog imunoglobulinskog receptora (PIGR) bio je značajno povišen u egzozomima izvedenim iz HCC, a pretpostavljena kombinovana efikasnost dva proteina bila je superiornija od one AFP.Preopterećenje gvožđem je važan faktor koji doprinosi razvoju HCC.Tseng je izvijestio da hepcidin može igrati ključnu ulogu u otpornosti na HCC.99 Egzozomi izvedeni iz seruma pacijenata sa HCC imali su značajno veći broj kopija varijanti mRNA hepcidina od njihovih zdravih kolega, što sugerira da hepcidin može biti novi dijagnostički biomarker za HCC.Protein 14-3-3ζ u egzosomima koji proizvodi 100 HCC može smanjiti aktivaciju, proliferaciju i diferencijaciju T ćelija i može inducirati transformaciju T ćelija u regulatorne T ćelije, što dovodi do iscrpljivanja T ćelija.101 Ovo je podržano od strane nekoliko studija koje istražuju izbjegavanje tumora od imunološkog nadzora, 102 što može doprinijeti tumorigenezi HCC.
Pored prisustva ecRNA u plazmi ili serumu, egzosomi obogaćeni RNA mogu se koristiti za neinvazivno određivanje stadija u realnom vremenu u ranom skriningu tumora i za određivanje evolucije tumora i odgovora na terapiju.Nivo egzosomalne miRNA-21 u krvnom serumu u HCC grupi bio je 2,21 puta veći nego u CHB grupi, a u HCC grupi bio je 5,57 puta veći nego u zdravoj populaciji.U Wang studiji, egzosomi su značajno povećali HCC u poređenju sa pacijentima s cirozom sa AUC vrijednostima od 0,83 (95% CI 0,74–0,93) i 0,94 (95% CI 0,88–1,00).104 Dobijeni podaci su razjasnili učešće specifičnih egzosomalnih kargo molekula u regulaciji onkogeneze i progresije HCC.105 Serumska ekspresija miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 i miR-26a je konzistentna.i metastaze, a nivoi miR21 su bili mnogo viši kod pacijenata sa HCC nego u zdravih kontrolnih grupa, kao i kod pacijenata sa CHB.102 LncRNA je imala potencijalnu dijagnostičku vrednost kod HCC.Studije su pokazale da egzosomi izvedeni iz seruma pacijenata sa HCC imaju značajno više nivoe LINC00161, LINC000635 i lncRNA aktivirane transformacijom faktora rasta-β nego kod pacijenata bez HCC, a ove lncRNA su snažno povezane sa TNM stadijumom i zapreminom tumora.110 Conigliaro et al.Utvrđeno je da CD90+ egzosomi eksprimiraju visoke nivoe lncRNAH19, što značajno povećava oslobađanje vaskularnog endotelnog faktora rasta (VEGF) i proizvodnju VEGF-R1 receptora, čime se stimulira angiogeneza.93 CircRNA su još jedan tip egzosomalnih ncRNA – izražene na nižim, ali stabilnim nivoima među vrstama, circRNA također pokazuju specifičnost za tip ćelije, tip tkiva, razvojnu fazu i regulatornu aktivnost.111 circRNA su dijagnostički biomarkeri za rani i minimalno invazivni karcinom.112 Nedavna klinička ispitivanja su pokazala da specifičnost pojedinačnih miRNA u predviđanju HCC nije idealna.Stoga, kompleksna detekcija korištenjem višestrukih testova (npr. miR-122 i miR-48a u kombinaciji sa AFP) može poboljšati identifikaciju ranog HCC-a i diferencijaciju HCC-a od ciroze.100
Pacijenti sa CHB i cirozom jetre najčešća su grupa visokog rizika za razvoj HCC.Za visokorizične grupe, nakon što se postigne održiv virološki odgovor, treba razviti ekonomičnu strategiju nadzora zasnovanu na riziku od HCC, a rani skrining je ključ za poboljšanje dijagnoze i liječenja HCC s visokim omjerom isplativosti2 ..Metode ranog skrininga za rak imaju mnoga ograničenja: efikasne metode ranog skrininga nisu razvijene za većinu vrsta raka, a pridržavanje je obično nisko.U poređenju sa tradicionalnim metodama ranog skrininga, tehnologija tečne biopsije ima očigledne prednosti: jednostavnost uzorkovanja, panrac detekciju, dobru reproduktivnost uzorka i efikasan odgovor na heterogenost tumora.S obzirom na isplativost metoda povezanih s tečnom biopsijom, njihova upotreba u skriningu HCC nije rutinski testirana.Uprkos napretku u preciznoj detekciji na molekularnom nivou, biopsija tečnosti je skupa za otkrivanje HCC kod ciljnih pacijenata, ograničavajući njenu široku upotrebu u poređenju sa specifičnim postupcima snimanja kao što su ultrazvuk i magnetna rezonanca.113,114 Međutim, prethodna studija je pokazala da je tečna biopsija pokazala značajnu korist u smislu godina života prilagođenih kvaliteti (QALY).115 Takođe su prikazane prednosti tečne biopsije kod ranog karcinoma želuca i nazofarinksa.116,117 Trenutni stav je da tečna biopsija može dopuniti serumske biomarkere i radiološki skrining u otkrivanju i dijagnostici tumora.117 118
Prema trenutnoj literaturi, tehnologija tečne biopsije pokazala je značajno veću osjetljivost i specifičnost u ranom skriningu visokorizičnih grupa za rak jetre.Bez obzira na vrstu biopsije tečnosti, može razlikovati HCC od visokorizičnih osoba bez HCC, što ukazuje na važnost ranog skrininga jer su razlike između visokorizičnih i zdravih osoba evidentne.ctDNK ima kratak poluživot i može se koristiti za otkrivanje HCC-a, tako da bilo kakve promjene u cDNK dobivenoj iz tumora mogu pružiti konkretan dokaz progresije tumora u stvarnom vremenu, posebno za male tumore.Visok nivo ctDNK ukazuje na razvoj i širenje raka i rani je pokazatelj progresije i recidiva.Osim toga, na osnovu rezultata ctDNK, pacijenti mogu dobiti individualizirani tretman i praćenje.119 Specifična mjesta metilacije mogu biti bolji marker od AFP-a za ranu identifikaciju HCC-a i cirotičnih nodula.U resektabilnim slučajevima HCC, visoki nivoi cDNK ukazuju na mikrovaskularnu invaziju i postoperativni recidiv i metastaze.Promjene u broju kopija povezane su sa preživljavanjem pacijenata sa HCC.Može se pretpostaviti da cDNK evaluacija može biti uključena u cjelokupni tretman HCC, a cDNK može poslužiti kao efikasan indikator terapijske modulacije.Markeri zasnovani na specifičnim genetskim mutacijama u ctDNK usvojeni su u kliničkim smjernicama za predviđanje efikasnosti i praćenje rezistencije na lijekove.ctDNK testiranje može biti najkorisniji alat za tečnu biopsiju za rani skrining.CTC također igraju ključnu ulogu u ranom skriningu visokorizičnih grupa HCC.Različiti markeri CTC-a povezanih s HCC su od posebne važnosti u nastanku, razvoju i recidivu HCC.Kao membranske vezikule, egzosomi su uključeni u međućelijsku komunikaciju, posebno u HCC ćelijama.Cirkulirajuće mikroRNA su stabilne u krvi i stoga mogu biti korisnije za rani skrining HCC.Postepeno su otkriveni egzosomalni proteini i egzosomi bogati RNA, a njihova prediktivna efikasnost za HCC je potvrđena.Zanimljivo je da različite etiologije HCC mogu biti povezane s različitim mutacijama, tako da možemo odabrati različite biomarkere za rani skrining na osnovu različitih etiologija HCC.120
Međutim, trenutne tehnike biopsije tekućine su upitne u smislu stabilnosti i ne mogu samostalno izvršiti rani skrining ili praćenje HCC, ali i dalje mogu dopuniti individualni skrining i dijagnozu.121 Kao oblik tečne biopsije, detekcija i snimanje ctDNA, CTC, cfRNA i AFP-a ili PIVKA-II povezanih s egzozomima imaju obećavajuću primjenu u ranoj dijagnozi i prognozi HCC.Međutim, tačan mehanizam oslobađanja ctDNA u krv ostaje da se razjasni.Otkrivanje osnovnih bioloških svojstava ctDNK može olakšati njenu upotrebu kao markera.Mala količina ctDNK u cirkulaciji i strogi zahtjevi za rukovanje uzorcima predstavljaju izazove za kliničku implementaciju detekcije cDNK u HCC.Osim toga, genetske mutacije nemaju specifične karakteristike koje omogućavaju tačnu identifikaciju kancerogena.Budući da su višestruke genetske i somatske varijante također prisutne u normalnim tkivima, genetske mutacije identificirane tečnom biopsijom mogu biti od ograničene koristi u ranom skriningu za HCC.122 Ograničenja dobro definiranih korisnih genskih ciljeva i biomarkera koji pomažu u razlikovanju cDNK od netumorske DNK su najvažnija pitanja u korištenju cDNK.nedostatak korisnosti osjetljivih i specifičnih markera za detekciju CTC.Pronađene su samo održive ćelije sa metastatskim potencijalom, a optimalna kombinacija markera obogaćenih CSC nije bila jasna.Izolacija CTC-a za kulturu i evaluacija njihovih mutacijskih profila također je izazovan zadatak.Zbog problema s identifikacijom, izolacijom i pročišćavanjem egzosoma, specifični molekularni mehanizam je još uvijek nejasan, a prethodne studije o mehanizmu egzosoma i HCC nisu bile detaljnije, kao ni o načinu na koji su miRNA, lncRNA i proteini razvrstani u egzosome. , i nije jasno da li je unos egzosoma proces specifičnog tipa.Upotreba egzosoma za dijagnozu i liječenje HCC je još uvijek u pretkliničkoj fazi.Nedostatak standardizacije postupaka tečne biopsije, kao što je vrsta epruveta koje se koriste za prikupljanje krvi, volumen krvi, skladištenje i otkrivanje uzoraka, izolacija i obogaćivanje, može onemogućiti njihovu upotrebu u rutinskoj kliničkoj praksi zbog razlika u praksi u medicinskim centrima.Ostaje da se istraži efikasnost tečne biopsije u ranom skriningu, dijagnozi, evaluaciji efikasnosti i predviđanju HCC, posebno za grupe visokog rizika.Tehnologija tekuće biopsije ima veliki potencijal i očekuje se da će se u bliskoj budućnosti široko koristiti u kliničkoj praksi raka jetre.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL et al.Globalna statistika raka 2020: GLOBOCAN procjenjuje učestalost i smrtnost od 36 vrsta raka u 185 zemalja.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Sjedište Nacionalne zdravstvene komisije.Kriterijumi za dijagnozu i liječenje primarnog karcinoma jetre (izdanje 2022.) [J].Journal of Clinical Liver Diseases, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z, et al.Smjernice za dijagnozu i liječenje hepatocelularnog karcinoma (izdanje 2019.).Rak jetre.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K, et al.Smjernice za kliničku praksu za hepatocelularni karcinom: Japansko društvo za bolesti jetre, 2017 (JSH-HCC 4. smjernice), ažuriranje 2019.Rezervoar za bolesti jetre.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA. Tečna biopsija kod kronične bolesti jetre.Ann Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Tečna biopsija raka dojke: fokusirani pregled.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Nadzor za hepatocelularni karcinom: trenutne najbolje prakse i budući pravci.Gastroenterologija.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. European Research Association L, European Organization R, C Therapeutics.Kliničke smjernice EASL-EORTC: liječenje hepatocelularnog karcinoma.J Heparin.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.Kombinovana analiza AFP i HCCR-1 kao korisnih seroloških markera u malom hepatocelularnom karcinomu: prospektivna kohortna studija.Dis Mark.2012;32(4):265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, et al.Diferencijalna ekspresija mikroRNA-125b u plazmi kod bolesti jetre povezanih s virusom hepatitisa B i dijagnostički potencijal hepatocelularnog karcinoma izazvanog virusom hepatitisa B.Rezervoar bolesti jetre.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Biologija i značaj alfa-fetoproteina u hepatocelularnom karcinomu.Liver int.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, et al.Kliničke smjernice za liječenje hepatocelularnog karcinoma u azijsko-pacifičkoj regiji: ažuriranje iz 2017.Međunarodna organizacija za bolesti jetre.2017;11(4):317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei et al.Dijagnostička vrijednost seruma PIVKA-II samog ili u kombinaciji sa AFP-om kod kineskih pacijenata sa hepatocelularnim karcinomom.Dis Mark.2021;2021:8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Biopsija humoralne tečnosti bez plazma karcinoma pluća ne-malih ćelija: bliže tumoru!ćelija.2020;9(11).doi: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. Tečna biopsija: trenutno stanje i budući izgledi.Tretman Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, et al.Biopsija raka na bazi tekućine: multimodalni dijagnostički alat u kliničkoj onkologiji.Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Nukleinske kiseline u ljudskoj plazmi.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.Napredna detekcija cirkulirajuće tumorske DNK analizom veličine fragmenata.Nauka prevodi medicinu.2018;10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Dužina fragmenta cirkulirajuće DNK tumora.PLOS geni.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. Cirkulirajuća DNK tumora: obećavajući biomarker u tečnoj biopsiji raka.ciljni tumor.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.Detekcija cirkulirajuće DNK tumora u ranim i kasnim stadijumima humanih maligniteta.Nauka prevodi medicinu.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Tečna biopsija za mutacionu prediktivnu analizu solidnog raka: perspektiva patologa.J Biotechnology.2019;297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Rano otkrivanje tumora kružećom plazma DNK skriningom: hype ili nada?Belgijsko kliničko pravo.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Utjecaj virusa hepatitisa i starenja na metilaciju DNK u humanoj hepatokarcinogenezi.Histopatologija.2010;25(5):647–654.doi: 10.14670/HH-25.647